BalanCD HEK293 Viral Feed

將HEK293細(xì)胞中的病毒載體產(chǎn)量提高10倍

◆收益良多

BalanCD HEK293 Viral Feed可通過(guò)提高病毒載體的產(chǎn)量，開(kāi)發(fā)改變生命的療法和疫苗。

高性能：血清型 AAV2、AAV5 和AAV9 的病毒基因組 (VG) 滴度增加了3至10 倍

靈活：可兼容一系列不可知的基礎(chǔ)生長(zhǎng)培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)染方法

高效：與不含補(bǔ)料的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)照組相比，病毒包裝效率提高了67%

◆HEK293 細(xì)胞系的不間斷補(bǔ)料供應(yīng)

專為HEK293細(xì)胞設(shè)計(jì)的病毒補(bǔ)料

AAV流程：從生產(chǎn)到治療性蛋白的表達(dá)

病毒滴度成倍增加

BalanCD HEK293 Viral Feed 可提高 VG/capsid產(chǎn)量，并使滴度成倍增加，從而幫助生產(chǎn)商為其應(yīng)用獲得更多產(chǎn)出。

細(xì)胞生長(zhǎng)：活細(xì)胞密度 (VCD) 和活率保持一致

圖1. 將HEK293懸浮細(xì)胞（細(xì)胞系1）接種在 BalanCD HEK293 培養(yǎng)基（30 mL）中，24 h后使用PEIpro方法，以 1.8-1.9 X10⁶的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)染1.5 μg DNA/mL（DNA 與PEI 的比率為1 : 2).轉(zhuǎn)染后的24 h， 以12% v/v的濃度添加BalanCD HEK293 Viral Feed。 收獲時(shí)繪制活細(xì)胞密度（A）和活力（B）。 數(shù)據(jù)顯示補(bǔ)料培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和活性沒(méi)有不利影響。

添加補(bǔ)料后 AAV2 滴度提高

圖2. 使用經(jīng)過(guò)三次循環(huán)凍融的細(xì)胞提取物檢測(cè)AAV2病毒基因組滴度和衣殼滴度，再通過(guò)離心澄清，并用DNAse I和裂解緩沖液處理，然后進(jìn)行qPCR（使用 AAVpro 滴定試劑盒，Takara Bio）和ELISA（AAV2 滴定 ELISA，Progen）。數(shù)據(jù)表明，添加補(bǔ)料培養(yǎng)基使AAV2 產(chǎn)量在VG方面提高了約10倍，在衣殼滴度方面提高了6倍。 整體結(jié)果顯示，病毒包裝率提高了約 67%，從基礎(chǔ)的 13% 提高到基礎(chǔ)+補(bǔ)料的 21.81%（數(shù)據(jù)未顯示）。

多種 AAV 血清型的病毒滴度  

圖3. AAV2、AAV5 和 AAV9 在 HEK293 懸浮細(xì)胞系 2 中產(chǎn)生。將細(xì)胞接種在 BalanCD HEK293 培養(yǎng)基（30 mL）中，24 h后，當(dāng)細(xì)胞密度為2.8 X 10 ⁶ cells/mL 時(shí)，使用 1 μg DNA/mL 的 PEIpro 方法進(jìn)行轉(zhuǎn)染（DNA 與 PEI 的比例為 1:2）。轉(zhuǎn)染后 24 h，加入濃度為 12% v/v 的 BalanCD HEK293 Viral Feed。通過(guò)微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）檢測(cè)VG 滴度數(shù)據(jù)。與對(duì)照（僅有基礎(chǔ)培養(yǎng)基）相比，血清型AAV2、AAV5 和 AAV9 的病毒基因組 (VG) 滴度增加了 3 倍以上。（按上圖所示）

BalanCD HEK293 Viral Feed 在 10 L放大反應(yīng)中提高了 AAV 滴度

圖 4. 驗(yàn)證 BalanCD HEK293 Viral Feed在 10 L 生物反應(yīng)器規(guī)模中提高 AAV5 產(chǎn)量的性能。將HEK293 懸浮細(xì)胞（細(xì)胞系 2）以 0.8X106 cells/mL 的密度接種在 8.3 L 培養(yǎng)體積 的10 L 生物反應(yīng)器（XDR10 生物反應(yīng)器）中。轉(zhuǎn)染 24 h后， 以 12% v/v 的濃度添加BalanCD HEK293 Viral Feed。 使用 ddPCR 檢測(cè)滴度。

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