簡要描述：本試劑盒是可以定性分析細(xì)胞培養(yǎng)上清和體液樣品中提取的細(xì)胞外囊泡，以及定量分析細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品中的細(xì)胞外囊泡的ELISA試劑盒。讓細(xì)胞外囊泡表面的磷脂酰si氨酸（PS）特異性結(jié)合的蛋白在固定化的板上與細(xì)胞外囊泡反應(yīng)并固定后，用任意細(xì)胞外囊泡表面標(biāo)記蛋白的小鼠單抗作為檢測一抗，試劑盒中的HRP標(biāo)記抗小鼠IgG抗體為二抗，可高靈敏度檢測表面具有任意標(biāo)記蛋白的細(xì)胞外囊泡。
產(chǎn)品型號
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產(chǎn)品分類
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
◆產(chǎn)品概要
本試劑盒是可以定性分析細(xì)胞培養(yǎng)上清和體液樣品中提取的細(xì)胞外囊泡，以及定量分析si氨酸（PS）特異性結(jié)合的蛋白在固定化的板上與細(xì)胞外囊泡反應(yīng)并固定后，用任意細(xì)胞外囊泡表面標(biāo)記蛋白的小鼠單抗作為檢測一抗，試劑盒中的HRP標(biāo)記抗小鼠IgG抗體為二抗，可高靈敏度檢測表面具有任意標(biāo)記蛋白的細(xì)胞外囊泡。
◆特點
采用PS結(jié)合分子Tim4包被板，可高靈敏度定性·定量檢測培養(yǎng)上清中的細(xì)胞外囊泡
● 通過磷脂酰si氨酸（PS）結(jié)合分子進行捕獲。※1
● 可檢測出0.1 μL左右培養(yǎng)上清液的細(xì)胞外囊泡。
● 可用純化細(xì)胞外囊泡標(biāo)準(zhǔn)品※2 定量檢測。
● 高靈敏度檢測（檢測靈敏度可達WB※3 的50～1,000倍）。
使用優(yōu)化的試劑組成的試劑盒，操作簡便，實驗重復(fù)性高
● 優(yōu)化對照用的一抗※4
● 優(yōu)化檢測用的二抗※5
● 采用顯色法
※1 本方法比起使用抗體包被板的ELISA法，可以更好地定性·定量分析細(xì)胞外囊泡。
※2 請使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS純化的細(xì)胞外囊泡標(biāo)準(zhǔn)品。
※3 WB法：免疫印跡實驗
※4 配套抗人CD63抗體。檢測其他表面標(biāo)記蛋白可使用任意小鼠單抗。
※5 配套抗小鼠IgG抗體-HRP標(biāo)記。
◆試劑盒組成
試劑盒組成（96次） | 包裝 |
捕獲外泌體96孔板 | 1個（8 well×12 strips） |
反應(yīng)/洗滌緩沖液（10×） | 50 mL×2瓶 |
外泌體結(jié)合增強子（100×） | 10 mL×1瓶 |
對照一抗Anti-CD63（100×） | 120 μL×1瓶 |
二抗HRP綴合抗小鼠IgG（100×） | 120 μL×1瓶 |
TMB溶液 | 12 mL×1瓶 |
終止液 | 12 mL×1瓶 |
封板膜 | 4個 |
說明書 | 1本 |
◆應(yīng)用實例
從各種細(xì)胞培養(yǎng)上清提取細(xì)胞外囊泡的定性分析
將1 ng從各種細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取的細(xì)胞外囊泡添加至孔中，使用能識別表面標(biāo)記蛋白CD9、CD63、CD81的一抗通過本試劑盒對各表面標(biāo)記量進行定性比較。
另外，作為比較參考數(shù)據(jù)，將150 ng從各細(xì)胞培養(yǎng)上清提取的細(xì)胞外囊泡進行電泳，使用能識別表面標(biāo)記的CD9、CD63、CD81的一抗對各表面標(biāo)記蛋白量以Western blotting進行定性分析。
提取外泌體（1 ng/well）的定性比較數(shù)據(jù) 參考比較數(shù)據(jù)
在ELISA系統(tǒng)和WB分析之間，標(biāo)記蛋白的表達模式具有相關(guān)性。
參考數(shù)據(jù)：各種細(xì)胞的外泌體標(biāo)記蛋白表達分析
分別使用1 ng各種細(xì)胞的培養(yǎng)上清液來源純化外泌體（使用MagCapture來源外泌體提取試劑盒 PS），外泌體標(biāo)記蛋白CD9、CD63、CD81對應(yīng)的抗體，進行表達分析。
檢測抗體
<ELISA>
抗CD9小鼠單抗（M-L13）
抗CD63小鼠單抗（H5C6）
<WB>
抗CD9兔多抗
抗CD63小鼠單抗（8A12）
抗CD81小鼠單抗（1D6）
細(xì)胞株不同，表達量wan全不同！
有的細(xì)胞株中可能存在對特定標(biāo)記蛋白的表達較少的外泌體。
從正常人血清中提取的細(xì)胞外囊泡的定性分析
從正常人血清的6個樣品分別提取細(xì)胞外囊泡，通過BCA法算出細(xì)胞外囊泡膜上的蛋白濃度。分別添加40、20、10 ng的細(xì)胞外囊泡到孔中，用可識別表面標(biāo)記CD63的對照組檢測一抗（試劑盒配套）對檢測的OD值進行定性比較。
提取外泌體（1 ng/well）的定性比較數(shù)據(jù)
即使是從體液樣品中純化的細(xì)胞外囊泡也具有良好的線性
從細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取的細(xì)胞外囊泡的檢測靈敏度的參考數(shù)據(jù)
從COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取細(xì)胞外囊泡，比較本試劑盒和免疫印跡的檢測靈敏度。
Western blot和ELISA的檢測靈敏度比較
圖（a），（b）為使用各種抗CD63抗體（其他公司產(chǎn)品，F(xiàn)UJIFILM Wako產(chǎn)品： 012-27063）進行免疫印跡的檢測靈敏度數(shù)據(jù)
樣品：COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清提取細(xì)胞外囊泡（使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS提取）
★：各抗體中免疫印跡的檢測上限。
圖（c）Exosome ELISA Kit檢測上限數(shù)據(jù)
使用本試劑盒梯度稀釋COLO201細(xì)胞來源的純化細(xì)胞外囊泡（使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS）后的樣品以及僅有緩沖液的空白值檢測并制備COLO201標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用此標(biāo)準(zhǔn)曲線可算出COLO201來源純化樣品的zui低檢測靈敏度。（按照各濃度點n=6，空白點n=12檢測）
相比免疫印跡，可以更高靈敏度地檢測標(biāo)記蛋白。
從細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取細(xì)胞外囊泡的稀釋線性（Linearity）參考數(shù)據(jù)
用從COLOC201細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取的細(xì)胞外囊泡作為標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，評價COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品的5個稀釋度（1：100-1：1600）的線性。
COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清
COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清 | |||||
細(xì)胞傷情量 （μL） | 稀釋 | 測定值 （ng/mL） | 期望值 （ng/mL） | 預(yù)期百分比 | |
比例 | 稀釋因子（×） | ||||
0.0625 | 1：1600 | 0.000625 | 0.89 | 0.91 | 98.4 |
0.125 | 1：800 | 0.00125 | 1.82 | 1.72 | 105.6 |
0.25 | 1：400 | 0.0025 | 3.44 | 3.52 | 97.8 |
0.5 | 1：200 | 0.005 | 7.04 | 6.78 | 103.9 |
1 | 1：100 | 0.01 | 13.6 | — | — |
標(biāo)準(zhǔn)品：COLO201細(xì)胞來源外泌體
（使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS純化）
檢測樣品：COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清
一抗：試劑盒配套抗CD63抗體
可以確認(rèn)到良好的稀釋線性以及可檢測出0.1 μL細(xì)胞外囊泡。
檢測不同接種細(xì)胞數(shù)和不同培養(yǎng)時間的培養(yǎng)基中的細(xì)胞外囊泡
在T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中接種1×107、2×107、3×107的COLO201細(xì)胞，培養(yǎng)72 h。每24 h回收一部分的培養(yǎng)上清樣品，用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）和試劑盒配套的Control Primary Antibody Anti CD63 (100×) 進行CD63的吸光度檢測。
準(zhǔn)備4 μL的細(xì)胞培養(yǎng)上清，用添加了Exosome Binding Enhancer的反應(yīng)液/清洗液（1×）稀釋至100 μL。
● 檢測樣品：COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清（25倍稀釋）
● 接種細(xì)胞數(shù)：1×107、2×107、3×107個細(xì)胞/瓶
● 培養(yǎng)時間：24 h、48 h、72 h
● 一抗：抗CD63抗體
只需使用4 μL的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，就可直接檢測細(xì)胞外囊泡量，在討論新型的細(xì)胞株的培養(yǎng)條件時，省去了討論條件的時間。
可以簡單方便地討論如何分泌最多的細(xì)胞外囊泡的條件。
添加藥物后引起細(xì)胞外囊泡數(shù)量的變化
在T225培養(yǎng)瓶接種K562細(xì)胞，以無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h。之后更換添加終濃度為10 μmol/L的莫能菌素鈉和不含莫能菌素鈉的無血清培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)后回收培養(yǎng)上清樣品，用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）和試劑盒配套Control Primary Antibody Anti CD63（100×），檢測CD63的吸光度。
用添加了Exosome Binding Enhancer的反應(yīng)液/清洗液（1×）稀釋回收后的細(xì)胞培養(yǎng)上清，分別作為10倍稀釋和100倍稀釋的細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品。
● 檢測樣品：K562細(xì)胞培養(yǎng)上清（更換含莫能菌素鈉（產(chǎn)品編號：ALX-380-026-G001）的培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基后培養(yǎng)24 h）
● 一抗：抗CD63抗體
無需提取，少量培養(yǎng)基即可檢測。
可檢測培養(yǎng)基中外泌體量隨時間的變化，由于可數(shù)值化外泌體變化量，因此相比WB法更容易進行比較。
使用COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清來源和人血清來源純化外泌體比較檢測靈敏度
制備下列①~⑥的樣品，比較用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒、A公司ELISA試劑盒、A公司ELISA試劑盒（高靈敏型）檢測外泌體標(biāo)記蛋白CD63時的靈敏度。
使用樣品內(nèi)容
① A公司ELISA試劑盒配套標(biāo)準(zhǔn)品
② A公司ELISA試劑盒（高靈敏型）配套標(biāo)準(zhǔn)品
③ 用MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS提取COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清來源外泌體
④ 用聚合物沉淀法提取COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清來源外泌體
⑤ MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS提取人血清來源外泌體
⑥ 聚合物沉淀法提取人血清來源外泌體
① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ | |
x1 | 1/16 | 1/1000 | 40 ng/mL | 160 ng/mL | 800 ng/mL | 2000 µg/mL |
x0.5 | 1/32 | 1/2000 | 20 ng/mL | 80 ng/mL | 400 ng/mL | 1000 µg/mL |
x0.25 | 1/64 | 1/4000 | 10 ng/mL | 40 ng/mL | 200 ng/mL | 500 µg/mL |
x0.125 | 1/128 | 1/8000 | 5 ng/mL | 20 ng/mL | 100 ng/mL | 250 µg/mL |
x0.0625 | 1/256 | 1/16000 | 2.5 ng/mL | 10 ng/mL | 50 ng/mL | 125 µg/mL |
PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒相比A公司ELISA試劑盒和A公司ELISA試劑盒（高靈敏型），可更靈敏地檢測到CD63。另外，A公司ELISA試劑盒和A公司ELISA試劑盒（高靈敏型）對各自試劑盒配套標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)敏感，但對PS提取外泌體的反應(yīng)性弱。
由此證明，PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒相比公司ELISA試劑盒和A公司ELISA試劑盒（高靈敏型），可以更高特異性且高靈敏性地檢測外泌體表面的CD63。
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 297-79201 | PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD) PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD） | 96 tests | - | - |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 299-77603 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS | 2 tests | - | - |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS | 10 tests | - | - |
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