蛋白質組學用蛋白質增溶劑

LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution

◆蛋白質組學中的蛋白提取挑戰

蛋白質組學（Proteomics）是一種全面分析樣品中蛋白質的方法。它的過程包括從樣品中提取蛋白質、使用消化酶切割蛋白質，再通過液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）分析肽段的結構信息。近數十年，大量的改進方法應用于LC-MS/MS，例如色譜柱和色譜填料的改進，以及質譜的靈敏度和掃描速度的提升，使得同時對多個樣本進行分析得以實現，與此同時，對于低豐度蛋白的定性以及定量評價也得以實現。

LC-MS/MS的前處理步驟——蛋白質提取和酶切對蛋白質組學實驗結果起到至關重要的作用。其中最大的挑戰是提高蛋白質的回收率同時還需要在低漏切的情況下保證酶解效率。尤其是膜蛋白這類疏水性高難以提取的一類蛋白質。在蛋白質組學中膜蛋白的提取常需要使用強力的增溶劑。然而，強力的增溶劑會抑制后續步驟使用的消化酶的活性，影響肽段分離和LC-MS/MS中的離子的檢測。

因此，FUFJIFILM Wako開發了以脫氧膽酸鈉為主要成分的相轉移溶劑（Phase Transfer Surfactant），這是一款可溶解難溶蛋白，不抑制消化酶的活性且容易去除的理想增溶劑^1）。使用了它的前處理法命名為PTS法，該方法已被廣泛報道為一種用于蛋白組學分析制備疏水蛋白（包括膜蛋白）的有效方法。

圖1. 使用PTS法提取蛋白

基于文獻1）制備

◆LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution

LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution是在蛋白質組學前處理步驟的蛋白提取中使用的增溶劑。該產品基于PTS方法開發，可有效溶解難溶性蛋白，同時不抑制消化酶的活性，并可通過液-液分配方式輕松去除試劑。本產品是根據之前的報道PTS溶液^1-2）改良的，相比以前的PTS溶液，它的蛋白增溶性和蛋白消化酶活性更高，而且因消化酶導致的漏切也更低。也可用于外泌體等細胞外囊泡的蛋白質組學。

◆特點

● 可提取疏水性高的蛋白質，包括膜蛋白

● 不抑制消化酶活性

● 通過液液分配方式可輕易去除

◆Protocol

從細胞中提取蛋白

從細胞外囊泡（EV）中提取蛋白（使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）

詳細的Protocol請參考產品的使用說明書。

◆數據

蛋白的可溶性

蛋白消化酶的活性和漏切的發生率

蛋白消化酶的活性

漏切的發生數

CDC：e去氧膽酸；SC：膽酸鈉；SDC：脫氧膽酸鈉；SLS：月桂酰肌氨酸鈉；UDC：xiong去氧膽酸

【結果】

盡管SDS+SLS的yi蛋白酶活性最高，但漏切的數量最多。相比之下，盡管本產品在yi蛋白酶中的酶活性低于SDC+SLS，但賴胺酰內肽酶的裂解活性最高，漏切數較低。因此，本產品是一款酶活性高，漏切數少，性能平均的PTS溶液。

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